न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के बाद गुणवत्ता पहचान गीत

न्यूक्लिक एसिड निष्कर्षण के बाद गुणवत्ता पहचान गीत

आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं में न्यूक्लिक एसिड शुद्धिकरण का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है।डाउनस्ट्रीम प्रयोगों के सुचारू प्रदर्शन के लिए उच्च गुणवत्ता और उच्च शुद्धता वाले डीएनए या आरएनए नमूने कैसे प्राप्त करें, यह महत्वपूर्ण है।इसलिए, शुद्ध न्यूक्लिक एसिड की पहचान भी एक आवश्यक कदम है।

शुद्धता मूल्यांकन

स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री

सिद्धांत: चूंकि न्यूक्लिक एसिड के सभी क्षारों में संयुग्मित दोहरे बंधन होते हैं, इसलिए उनमें यूवी अवशोषण गुण होते हैं।यूवी वर्णक्रमीय क्षेत्र में न्यूक्लिक एसिड का एक विशिष्ट अवशोषण वक्र होता है, जिसमें उनका अवशोषण शिखर 260 एनएम और अवशोषण गर्त 230 एनएम होता है।यूवी क्षेत्र में प्रोटीन का अवशोषण शिखर 280 एनएम है, इसलिए न्यूक्लिक एसिड का यूवी अवशोषण वर्णक्रमीय डेटा न्यूक्लिक एसिड पहचान के लिए महत्वपूर्ण आधारों में से एक है।

सही कमजोर पड़ने का चयन करें: सुनिश्चित करें कि OD260 मान 0.1 और 1.0 के बीच है।

डीएनए यील्ड = OD260 * कमजोर पड़ने वाला कारक * 50ng / μl, RNA यील्ड = OD260 * कमजोर पड़ने वाला मल्टीपल * 40ng / μl

डीएनए शुद्धता

OD260/OD280 = 1.7-1.9, OD260/OD230 = लगभग 2.0, अच्छी शुद्धता का संकेत देता है।

डीएनए शुद्धता की समस्या

OD260/OD280 <1.7, प्रोटीन संदूषण का संकेत।

OD260/OD280>1.9, आंशिक गिरावट या आरएनए संदूषण को इंगित करता है।

OD260/OD230 <2.0, नमक आयनों, कार्बनिक मैक्रोमोलेक्यूल अवशेषों को इंगित करता है।

आरएनए शुद्धता

OD260/OD280=1.9-2.1, OD260/OD230= लगभग 2.0, अच्छी शुद्धता का संकेत देता है।

आरएनए शुद्धता मुद्दे

OD260/OD280 <1.9, प्रोटीन या जीनोमिक अवशेषों को दर्शाता है।

OD260/OD280>2.1, RNA के आंशिक क्षरण को दर्शाता है।

OD260/OD230 <2.0, नमक आयन, मैक्रोमोलेक्यूल अवशेषों को दर्शाता है।

एकाग्रता का पता लगाना

न्यूक्लिक एसिड एकाग्रता का पता लगाने के लिए विभिन्न पहचान विधियां हैं, यह आलेख मुख्य रूप से फ्लोरोसेंस फोटोमेट्रिक विधि का परिचय देता है।

सिद्धांत: प्रतिदीप्ति फोटोमेट्री न्यूक्लिक एसिड बनाने के लिए बेस प्लेन में एम्बेडेड न्यूक्लिक एसिड डाई का उपयोग करती है जो यूवी उत्तेजना के तहत अपने आप में फ्लोरोसेंट फ्लोरोसेंट नहीं है, और प्रतिदीप्ति तीव्रता न्यूक्लिक एसिड सामग्री के समानुपाती है।अंत में, प्रतिदीप्ति तीव्रता द्वारा संगीत चलाने के लिए मानक वक्र का उपयोग कॉर्ड के रूप में किया जाता है।

न्यूक्लिक एसिड अखंडता आकलन

Agarose gel वैद्युतकणसंचलन निष्कर्षण के बाद न्यूक्लिक एसिड उत्पादों की अखंडता का आकलन करने के लिए उपयोग की जाने वाली पारंपरिक विधि है।जीनोमिक डीएनए के लिए, स्पष्ट एकल अखंडता बैंड प्राप्त किए जाते हैं;उच्च गुणवत्ता वाले कुल आरएनए के लिए, स्पष्ट 28s, 18s और 5s बैंड वैद्युतकणसंचलन के बाद प्राप्त किए जाते हैं।

जेनेटिक डीएनए इलेक्ट्रोफोरेटोग्राम

कुल आरएनए इलेक्ट्रोफोरेटोग्राम

बनीटीथ टेक्नोलॉजी इंक।

बनीटीथ टेक्नोलॉजी इंक बायोइंजीनियरिंग के लिए एक पूर्ण कोर टेक्नोलॉजी प्लेटफॉर्म बनाने, उच्च गुणवत्ता वाली बायोटेक उत्पाद श्रृंखला और एक तकनीकी सेवा श्रृंखला बनाने के लिए प्रतिबद्ध है, जिसमें आणविक और आनुवंशिक निदान में वैश्विक नेता बनने की महत्वाकांक्षा है।बनीटीथ टेक्नोलॉजी इंक ग्राहकों को मॉलिक्यूलर डायग्नोस्टिक्स और जेनेटिक डायग्नोस्टिक के क्षेत्र में वन-स्टेप सर्विस सॉल्यूशन की पूरी रेंज भी उपलब्ध कराएगी।